1.一种人类离体牙髓组织透明化方法,其特征在于包括以下步骤:(1)解剖牙髓及固定处理将人类离体牙齿直接浸泡于液氮中冷冻10~20分钟,使用牙科高速涡轮机及金刚砂车针将牙齿表面磨出凹痕直至靠近髓腔,然后使用牙科锤沿该凹痕敲开牙齿,取出其中牙髓;将牙髓使用细胞固定液进行常规固定处理4~24h后,洗涤以去除细胞固定液,作为已固定的牙髓组织;(2)脱水处理将步骤(1)所得已固定的牙髓组织,采用组织脱水剂进行脱水处理,得到已脱水的牙髓组织;所述组织脱水剂为甲醇或异丙醇;(3)漂白处理将步骤(2)所得已脱水的牙髓组织,采用过氧化氢甲醇溶液进行漂白处理,然后再次采用组织脱水剂进行复水处理,得到已漂白的牙髓组织;(4)染色预处理将甘油、Triton X-100和尿素添加入去离子水中混合均匀,配置得到抗原回收液;其中甘油、Triton X-100和尿素的质量百分比浓度分别为14~16%、5~10%和22~28%;将驴血清、二甲基亚砜和Triton X-100添加入PBS缓冲液中混合均匀,配置得到封闭缓冲液;其中驴血清、二甲基亚砜和Triton X-100的质量百分比浓度分别为8~10%、9~11%和0.4~0.6%;将步骤(3)所得已漂白的牙髓组织浸泡于抗原回收液中6~16小时,时间到达后,用添加有质量百分比浓度为2~3%胎牛血清的PBS缓冲液洗涤至少两次,以去除抗原回收液,然后浸泡于封闭缓冲液中30~37℃温度条件下孵育处理30~60分钟,作为已染色预处理的牙髓组织;(5)免疫荧光染色处理将驴血清、二甲基亚砜和Triton X-100添加入PBS缓冲液中混合均匀,配置得到抗体稀释液;其中驴血清、二甲基亚砜和Triton X-100的质量百分比浓度分别为1.5~2%、9~11%和0.4~0.6%;将驴血清和Triton X-100添加入PBS缓冲液中混合均匀,配置得到冲洗缓冲液;其中驴血清和Triton X-100的质量百分比浓度分别为1.5~2%和0.4~0.6%;当所需添加的抗体为共轭了荧光染料的抗体时:将抗体按照1:(100~200)的体积比例在抗体稀释液中稀释为抗体工作液,步骤(4)所得已染色预处理的牙髓组织浸泡于抗体工作液中3~4℃温度条件下孵育处理至少1天;时间到达后,用冲洗缓冲液进行洗涤,作为已经染色处理的牙髓组织;当所需添加的抗体为未共轭了荧光染料的抗体时:将抗体按照1:(100~200)的体积比例在抗体稀释液中稀释为抗体工作液,将荧光偶联剂按照1:(200~500)的体积比例在抗体稀释液中稀释为二抗工作液,步骤(4)所得已染色预处理的牙髓组织浸泡于抗体工作液中3~4℃温度条件下一抗孵育处理至少1天;时间到达后,用冲洗缓冲液进行洗涤,洗涤后浸泡于二抗工作液中3~4℃温度条件下二抗孵育处理至少0.5天;时间到达后,用冲洗缓冲液进行洗涤,作为已经染色处理的牙髓组织;(6)透明化处理将步骤(5)所得已经染色处理的牙髓组织,采用组织脱水剂进行脱水处理;然后用添加有质量百分比浓度为20~30%聚乙二醇双丙烯酸酯的Eci缓冲液进行洗涤,洗涤后浸泡入Eci缓冲液中作为透明化处理后的牙髓组织观察样本。
2.权利要求1所述人类离体牙髓组织透明化方法,其特征在于:步骤(1)中所述使用牙科高速涡轮机及金刚砂车针将牙齿表面磨出凹痕直至靠近髓腔,判断靠近髓腔的方式为磨出凹痕处能观察透出粉红色即可。
3.权利要求1所述人类离体牙髓组织透明化方法,其特征在于:步骤(1)中所述已固定的牙髓组织,还包括将已固定的牙髓组织放置于光滑平面上,将质量浓度为0.5~1%的琼脂糖凝胶融化后逐滴滴于牙髓组织表面,直至完全包覆牙髓组织,静置等待琼脂糖凝胶冷却凝固。
4.权利要求1所述人类离体牙髓组织透明化方法,其特征在于:所述脱水处理具体为:按照浓度梯度顺序,将牙髓组织依次浸泡在不同浓度的组织脱水剂中进行脱水处理,该浓度梯度顺序依次为质量百分比浓度28~32%、48~52%、78~82%及100%的组织脱水剂,且每次浸泡处理为10~60min。
5.权利要求1所述人类离体牙髓组织透明化方法,其特征在于:所述复水处理具体为:按照浓度梯度顺序,将牙髓组织依次浸泡在不同浓度的组织脱水剂中进行复水处理,该浓度梯度顺序依次为质量百分比浓度100%、78~82%、48~52%及28~32%的组织脱水剂,且每次浸泡处理为10~60min。
6.权利要求1所述人类离体牙髓组织透明化方法,其特征在于:步骤(1)中所述细胞固定液为质量百分比浓度为4%的多聚甲醛溶液。
7.权利要求1所述人类离体牙髓组织透明化方法,其特征在于:步骤(3)中所述采用过氧化氢甲醇溶液进行漂白处理,是采用体积百分比浓度为5%的过氧化氢甲醇溶液。
8.权利要求1所述人类离体牙髓组织透明化方法,其特征在于:步骤(5)中所述荧光偶联剂为cy3、cy5、Alexa Flour488其中任意一种。