1.sgRNA文库,其特征在于,所述sgRNA文库为MiTCL-L和/或MiTCL-S;所述MiTCL-L包含靶向表1中2796个基因的sgRNA,所述MiTCL-S包含靶向表2中273个基因的sgRNA。
2.根据权利要求1所述的sgRNA文库,其特征在于,所述MiTCL-L的靶标序列包含表1;所述MiTCL-S的靶标序列包含表2。
3.权利要求1或2所述的sgRNA文库在筛选肿瘤免疫相关的基因中的应用。
4.权利要求1或2所述的sgRNA文库在制备筛选肿瘤免疫相关的基因的试剂盒中的应用。
5.一种乳腺癌多维度免疫压力CRISPR文库筛选方法,其特征在于,利用权利要求1所述的sgRNA文库进行筛选,所述方法包括如下步骤:a)MiTCL-L质粒文库的构建;b)利用MiTCL-L文库进行首轮基于不同免疫压力小鼠模型的CRISPR筛选;c)利用生物信息学分析MiTCL-L免疫文库筛选结果,鉴定出三阴性乳腺癌免疫逃逸和免疫监视相关的候选基因;d)根据MiTCL-L文库筛选结果,进行次轮筛选MiTCL-S质粒文库的制备;e)基于MiTCL-S文库的次轮免疫筛选;f)利用生物信息学分析MiTCL-S免疫文库筛选结果,鉴定出免疫逃逸相关基因。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述步骤a)MiTCL-L质粒文库的构建使用权利要求1或2所述的MiTCL-L sgRNA文库。
7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述sgRNA与lentiGuide-Puro质粒连接、扩增构成MiTCL-L质粒文库。
8.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述步骤b)中,在4T1细胞中用慢病毒导入Cas9基因,筛选阳性细胞后再导入慢病毒包装的MiTCL-L文库,再筛选得到阳性的混合文库细胞;将阳性的混合文库细胞分成9份:3份细胞为第0天的基准细胞,立即抽取基因组DNA;3份细胞接种免疫完善的Balb/c小鼠,3份细胞接种免疫重度缺陷的NPG小鼠。
9.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述步骤c)中,利用基准细胞的DNA和移植瘤的DNA,采用巢式PCR的方案进行扩增、纯化和测序,采用MAGeCK算法,计算和比较了注射前的基线细胞和收集的肿瘤组织细胞的sgRNA的分布,计算每个基因在肿瘤组织细胞相较于基线细胞细胞的β值;经MAGeCK算法中的最大似然值估计法(MLE)模块计算得到每个基因的β值,并计算每个基因在Balb/c对比NPG筛选中的δ值;根据β值和δ值鉴定出一批三阴性乳腺癌免疫逃逸和免疫监视相关的候选基因。
10.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述步骤d)中,MiTCL-S质粒文库的构建使用权利要求1或2所述的MiTCL-S sgRNA文库。
11.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述步骤e)中,选用四种具有不同免疫缺陷的小鼠,注射感染MiTCL-S文库的4T1-Cas9细胞构建乳腺癌移植瘤模型,观察肿瘤生长并提取肿瘤组织基因组DNA进行二代测序。
12.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述步骤f)包括对二代测序结果进行MAGeCK算法分析,计算出(1)T、B、NK细胞筛选,(2)T、B细胞筛选,(3)T细胞筛选,(4)B细胞筛选,(5)B、NK细胞筛选和(6)NK细胞筛选共6种不同免疫压力筛选下的MiTCL-S文库中各基因的δ值,并利用FUSCC中TNBC队列的转录组数据对MiTCL-S文库基因在TNBC肿瘤组织中基因的表达情况进行分析,综合δ值和转录组数据筛选出TNBC中的免疫逃逸相关基因。