一种基于金-碳纳米球构建的microRNA检测探针及其制备方法和应用

1.一种基于金-碳纳米球构建的microRNA检测探针的制备方法，其特征是：使用透明质酸修饰的金-碳空心纳米球来搭载修饰有FAM荧光基团的DNA单链，DNA单链的序列与目标microRNA互补配对，进而制备出基于金-碳纳米球构建的microRNA探针；包括以下步骤：1)制备二氧化硅球模板称取100mL乙醇，于150mL烧杯中，加入1.5mL ddH 2 O和5mL质量百分比浓度为25-28％的氨水，用磁力搅拌器搅拌；搅拌均匀后，加入1.5mL正硅酸乙酯，室温搅拌反应4h，得到SiO 2 球；使用ddH 2 O分散得到的SiO 2 球，高速离心洗涤，重复三次，得到纯化后的SiO 2 球；2)制备聚多巴胺包裹的二氧化硅球将步骤1)得到的200mg纯化后的SiO 2 球加入到10mL 10mM的pH8.2的Tris缓冲液中，超声30min，然后在室温下搅拌反应48h；加入180mg盐酸聚多巴胺，在室温下搅拌反应48h；反应完成后，使用抽滤的方法收集反应产物，将收集到的反应产物使用ddH 2 O洗涤后冻干，得到聚多巴胺包裹的二氧化硅球；3)制备表面有金纳米颗粒的聚多巴胺包裹的二氧化硅球将25mg KAuCl 4 溶解到2mL ddH2O中得KAuCl 4 溶液，用2min时间将KAuCl 4 溶液加到步骤2)得到的聚多巴胺包裹的二氧化硅球中，在冰浴中快速搅拌30min；用抽滤的方法收集反应产物，将收集到的反应产物使用ddH 2 O洗涤后冻干，得到表面有金纳米颗粒的聚多巴胺包裹的二氧化硅球；4)制备表面分散有金纳米颗粒的中空碳纳米壳将步骤3)中得到的表面有金纳米颗粒的聚多巴胺包裹的二氧化硅球500℃碳化3h得到含有SiO 2 模板的金-碳纳米球；将获得的含有SiO 2 模板的金-碳纳米球置于塑料反应器中，加入质量浓度为4％的氢氟酸，搅拌反应，将SiO 2 模板消化掉，最终得到表面分散有金纳米颗粒的中空碳纳米壳；5)制备表面修饰透明质酸的AuHCNs将10mg表面分散有金纳米颗粒的中空碳纳米壳，分散于20mL 1×PBS缓冲液，超声20min，加入PDA-HA，搅拌反应24h；反应完成后，12000rpm离心15min，使用ddH 2 O洗涤3次后，冻干，储存， 得到表面修饰透明质酸的AuHCNs；6)制备基于金-碳纳米材料构建的microRNA检测探针将步骤5)中得到的表面修饰透明质酸的AuHCNs按照30 μ g /mL的浓度，与50nMProbe-miR21在PBS缓冲液中混合均匀，在摇床上猝灭30min后，得到基于金-碳纳米材料构建的microRNA检测探针。 2.由权利要求1所述制备方法制备得到的基于金-碳纳米材料构建的microRNA检测探针。 3.权利要求2所述基于金-碳纳米材料构建的microRNA检测探针在体外检测microRNA的应用，所述应用用于非疾病诊断目的。 4.权利要求2所述基于金-碳纳米材料构建的microRNA检测探针在用于细胞内microRNA的荧光成像中应用，所述应用用于非疾病诊断目的。