一种可检测热原的单克隆细胞系的制备方法

1.一种可检测热原的单克隆细胞系的制备方法，其特征在于，包括：（1）将NF-κB结合位点或者IFN-β启动子序列组装到可表达嘌呤霉素的慢病毒表达载体中，构建含有NF-κB结合位点或者IFN-β启动子序列的重组质粒；（2）将步骤(1)得到的重组质粒稳定转染到上皮细胞系中；（3）将步骤(2)得到的上皮细胞系使用嘌呤霉素筛选，并用流式分选单克隆细胞；（4）将步骤(3)得到的单克隆细胞使用高剂量的LPS刺激，其中对LPS有反应的则为NF-κB或者IFN-β阳性克隆；（5）将步骤（4）得到的阳性克隆使用更低剂量的LPS刺激，得到极灵敏的阳性克隆细胞；所述慢病毒表达载体为pCDH-CMV-MCS-EF1系列载体；所述上皮细胞系为人肺泡上皮细胞A549。 2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的NF-κB结合位点或者IFN-β启动子序列分别克隆自pNFκB-luc 或者pGL3-Control 质粒。 3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的高剂量的LPS，其浓度为500ng/ml。 4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的对LPS有反应是通过荧光素酶报告实验测定。 5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的更低剂量LPS，其浓度分别为1,10,50，100 ng/ml或者10,25，50，100 ng/ml。 6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的LPS刺激，其时间为6h。