一种下调真核基因表达的方法及其试剂盒

1.一种下调真核基因表达的方法，其特征在于，包括如下6个步骤：1)NgAgo基因的改造：在NgAgo基因序列末端引入一个核定位序列，并在其3’端加入polyA、在5’端加入5’-UTR序列和启动子SP6序列，改造的NgAgo基因的序列为SEQ ID NO.1；2)表达质粒的构建：改造的NgAgo基因序列和载体分别进行双酶切获取粘性末端的DNA序列，然后对DNA序列进行纯化回收，连接酶催化DNA序列并纯化回收获得Argonaute mRNA表达质粒；3)表达质粒经过线性化、体外转录、回收步骤获得Argonaute mRNA；4)根据目的基因序列设计并合成5’-p-ss-DNA Oligo，所述目的基因是真核生物基因，所述5’-p-ss-DNA Oligo序列与目的基因序列互补，特异性识别目的基因序列，5’-p-ss-DNA Oligo序列的长度为20-27bp，其5'端带有磷酸基团，所述磷酸基团通过与Argonaute蛋白结合，使Argonaute蛋白定位在基因靶位点上；5)将Argonaute mRNA和5’-p-ss-DNA Oligo导入靶细胞中，所述靶细胞为真核生物细胞；6)培养靶细胞至一定时间，观察细胞形态，通过PCR扩增目的基因，通过Sanger基因测序技术验证目的基因的突变情况，通过qRT-PCR检测目的基因的表达水平。 2.根据权利要求1所述的下调真核基因表达的方法，其特征在于，所述载体是pCS2+、pCS2、pcDNA3.1(+)或pcDNA3.1(-)中的一种。 3.一种下调真核基因表达的试剂盒，其特征在于，采用权利要求1所述的ArgonautemRNA或Argonaute表达质粒和5’-p-ss-DNA Oligo，该试剂盒中含有摩尔比为1：1的Argonaute mRNA和5’-p-ss-DNA Oligo，或者含有摩尔比为1：100的Argonaute表达质粒和5’-p-ss-DNA Oligo。