在分子诊断领域,数字PCR技术以其独特的绝对定量能力,正逐渐成为研究热点和临床应用的重要工具。相较于传统的实时PCR技术,数字PCR通过将反应体系分割成数万个微小反应单元,实现了对核酸样本拷贝数的精确计数,极大地提高了检测的准确性和灵敏度。目前,数字PCR技术主要基于两种技术路线:油包水液滴法和物理微孔式芯片法。然而,这两种方法在前处理阶段,即液滴生成或微孔上样过程中,均存在操作复杂、易引入人为误差的问题。因此,市场上现有的数字PCR系统通常分为三个独立模块:液滴制备/芯片上样仪、PCR扩增仪和阅读仪,这不仅增加了操作复杂度,也影响了检测效率。为了克服这些痛点,提高数字PCR技术的自动化水平和检测效率,我们提出了芯片式数字PCR全自动加样系统的技术需求。该系统旨在实现微孔芯片式数字PCR的全自动上样流程,无需人工操作即可完成样本与扩增试剂的混合、转移和芯片涂布,从而简化操作流程,减少人为误差,提高定量精准度。
数字PCR可以将一个反应体系分割成数万个微小反应体系,根据微小体系的阴阳性代入泊松分布公式中即可对核酸样本进行拷贝数的绝对定量,当前分子诊断领域,数字PCR技术发展迅速,目前主要有两种技术路线基于油包水液滴或物理微孔式芯片。液滴生成和微孔的方法都需要对扩增体系进行前处理,生成液滴或将扩增体系刷入微孔中,这就导致目前的数字PCR系统多分为三个模块即(液滴制备/芯片上样仪、PCR扩增仪、阅读仪),如何实现芯片上样的自动化,目前尚未有较好的解决方案。数字PCR的特点为能够绝对定量,自动化的解决方案有助于避免人为误差,使操作更简便可控,定量也可以做到更加精准。实现微孔芯片式数字PCR的全自动芯片上样系统,能够配套目前已上市微孔芯片数字PCR产品,完成全自动的芯片上样流程,无需人工操作即可进行样本与扩增试剂混合、混合后转移和芯片涂布。整个自动化效率需保证至少每3分钟1张片芯片的上样速度,同时上样完成后可自动转移至恒温扩增模块进行扩增。
