抗 CD19单链抗体嵌合抗原受体T细胞(CAR-T-19)的临床前研究

20210702

卫生和社会工作

抗 CD19单链抗体嵌合抗原受体 T细胞(CAR-T-19)的临 床前研究

北京市科学技术委员会;中关村科技园区管理委员会

CAR-T-19细胞识别和杀伤的靶标分子为表达于大多数B细胞急性淋巴细胞白血病和B细胞淋巴瘤表面的CD19分子。从工艺的可分割性来讲，CAR-T-19细胞的制备包括两个阶段。第一阶段为慢病毒载体的制备，所生产的慢病毒载体可以在-70℃条件下长期保存；第二阶段为CAR-T-19细胞的制备。 慢病毒载体的制备选择贴壁的293T细胞作为包装细胞。所建立的制备慢病毒载体用293T细胞主库和工作细胞库均经过中检院委托检验，质量符合生物制品细胞库规定。在慢病毒载体制备工艺中，申请人重点研究了超速离心浓缩工艺与慢病毒载体的纯化工艺，建立了制备符合质量标准的慢病毒载体包装和纯化工艺。 在慢病毒载体与CAR-T-19细胞的质量研究中，申请人建立了复制型病毒检测、载体拷贝数（VCN）检测等质量检测方法与质量标准。 在药理毒理研究中，申请人使用严重免疫缺陷小鼠B-NSG体内种植Raji-Fluc细胞（CD19+）的动物模型进行体内研究中，高剂量和低剂量的CAR-T-19细胞均显示了对体内肿瘤的清除作用。其中，高剂量CAR-T-19细胞的杀伤效果及疗效持久性均高于低剂量CAR-T-19细胞治疗。 在动物体内的安全性研究中，申请人使用严重免疫缺陷小鼠B-NSG进行了急性毒性试验、急性毒性伴随的局部刺激试验和免疫毒性(细胞因子分泌)试验、溶血性试验。结果表明，CAR-T-19细胞在部分B-NSG小鼠中产生了GVHD作用。除此之外，CAR-T-19细胞在B-NSG小鼠体内安全性良好。且未能显示出在临床治疗过程中发生的严重细胞因子风暴症状。 CAR-T-19细胞体内药代动力学（体内分布）研究分别采用B-NSG荷瘤鼠与非荷瘤鼠动物模型进行观察，CAR-T-19细胞经尾静脉输注给小鼠后，随血液快速分布于全身各个组织。在非荷瘤鼠中，CAR-T-19细胞随血液快速分布于全身各个组织，其中在脾脏、肺脏中分布最高、其次为血液，其他器官有少量分布。在荷瘤鼠中，CAR-T细胞在外周血中5min达到最高，随后呈下降趋势，3h时最低，随后CAR-T细胞含量显著升高，1天、6天和27天为CAR表达高峰时间点。非荷瘤鼠与荷瘤鼠在CAR-T-细胞进入体内后，均在脾脏、肺脏保持较高含量。而荷瘤鼠CAR-T-19细胞在血液中分布较多，可能与血液中肿瘤细胞的存在相关。 综上所述，申请人所建立的CAR-T-19注射液制备工艺能够生产出符合质量规定、适用于临床试验的个体化CAR-T-19细胞；这些细胞在体内外的效力得到验证，体内安全性良好。研究数据支持进行CAR-T-19注射液的临床试验。