多重荧光PCR改良分子信标和探针熔解曲线技术检测肠道病原体的方法

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成果单位：深圳市疾控中心

合作方式：面议

所处阶段：概念

关键词：食源性检测肠道病菌检测疾控机构检验检疫医院检验多重荧光PCR分子信标熔解曲线探针编码高通量检测

成果评价

总得分（满分100）

资本强度（满分0）

该成果得分：0

团队介绍

深圳市疾控中心扈庆华主任团队

单位: 深圳市疾控中心

人员:

扈庆华
- 职称: 正高二级
- 职务: 博士研究生导师
- 荣誉: 深圳市地方级领军人才，享受深圳市政府特殊津贴专家

负责的内容:

研究领域:
- 病原微生物分子诊断技术
- 病原菌基因组流行病学
- 耐药机制研究
主要贡献:
- 为细菌性食物中毒等多起突发公共卫生事件的应对提供快速准确的实验数据。
- 国内首次系统建立了基于探针编码和探针熔解曲线的31种食源性病原体快速检测方法，并在全国29个省492个单位推广使用。
- 国内首次开展重要肠道致病菌血清型分子鉴定系统的研究，广泛应用于临床和疾控机构的肠道致病菌血清型分子鉴定，减轻工作量。
- 成功创建了我国第一个腹泻病病原菌分子监测预警体系。 ,扈庆华主任团队，扈庆华，现任深圳市疾控中心副主任，正高二级，博士研究生导师，深圳市地方级领军人才，享受深圳市政府特殊津贴专家，一直从事病原微生物分子诊断技术、病原菌基因组流行病学和耐药机制研究，为细菌性食物中毒等多起突发公共卫生事件的应对提供快速准确的实验数据。国内首次系统建立了基于探针编码和探针熔解曲线的31种食源性病原体快速检测方法，在全国29个省492个单位推广使用；国内首次开展重要肠道致病菌血清型分子鉴定系统的研究，可广泛应用于临床和疾控机构的肠道致病菌血清型分子鉴定，减轻工作量；成功创建了我国第一个腹泻病病原菌分子监测预警体系。

小果解读

核心问题

当前食源性病原体检测主要面临单种病原体检测的局限性，无法同时检测多个病原体，导致检测过程耗时且人力成本高。另外，传统肠道致病菌分子分型方法操作繁琐、检测时间长、试剂价格昂贵，迫切需要一种高效、便捷的分子检测方法。

解决方案

本项目通过开发多重荧光PCR改良分子信标和探针熔解曲线技术，实现了同时检测多种食源性病原体。项目团队研制了包含多种引物组合的试剂盒，利用改良分子信标、荧光标记、熔点标签和熔解曲线技术的优势，创新性地发明了探针编码和探针熔解曲线技术。此技术覆盖细菌、病毒和寄生虫等32种病原体，极大地提高了检测效率。同时，针对肠道致病菌分子分型检测，项目改良了传统血清凝集实验，建立了沙门菌、副溶血弧菌、致泻性大肠杆菌等肠道致病菌血清型的分子鉴定方法。

竞争优势

该技术成果显著提高了食源性病原体的检测效率和准确性，降低了检测成本。其高通量检测技术具有自主知识产权，能够同时检测多种病原体，满足了疾控机构和基层医疗机构对早期快速诊断的需求。此外，改良的肠道致病菌分子分型检测方法简化了操作流程，缩短了检测时间，且覆盖范围广泛，为疾病的防控和预警预测提供了有力支持，具有显著的创新性和竞争优势。

成果描述

成果公开日期

20241222

产品设计方案

（1）食源性病原体解决方案：

病原体检测：项目团队开发了有多种引物及其组合的试剂盒，可同时进行多种病原体检测。集成了改良分子信标、荧光标记、熔点标签和熔解曲线技术的优势，发明了探针编码和探针熔解曲线技术，创建了具有我国自主知识产权的高通量检测技术，覆盖细菌、病毒和寄生虫等32种病原体。

（2）肠道致病菌分子分型解决方案：

分子分型检测：建立了沙门菌、副溶血弧菌、致泻性大肠杆菌等肠道致病菌血清型分子鉴定方法，可覆盖沙门菌200种血清型、副溶血弧菌13种O抗原和57种k抗原，5种致泻性大肠杆菌血清型。

产品组成包括检测用引物，探针，反应液buffer，辅助设备：荧光PCR仪器。

市场分析

据深圳市疾病预防控制中心提供检测数据推算：关于腹泻病原体的检测和分型检测的预计为56万人份，按照还有微生物检测中心，检验检疫中心，食品检测中心，环境检测中心的预计和疾控中心相同，基本测算为100万份，依据目前市场试剂盒每人份检测费用在52-120元之间，按照100元每人份检测花费，100万人份*100元=1亿元左右。

当前进展

本项目实际应用中效果良好，已到产业化阶段,本项目目前已完成专利保护且在实际检测中具有良好的检测效果本项目下一步计划开发同时检测细菌、病毒、寄生虫等多种病原体检测的引物组合及探针

摘要

1、食源性病原体检测：现有食源性腹泻的病原体检测主要是单种病原体检测，不能同时检测多个病原体，在鉴别某个病原体时，需进行多个检测试剂盒分别筛查，非常耗时且耗费人力。 2、肠道致病菌分子分型：现有病原体检测技术主要以传统的血清凝集实验为检测方法，操作繁琐，检测时间长，且血清试剂保质期较短、价格昂贵，急需便利的分子检测方法替代。,我国疾病预防控制机构病原微生物检测所、出入境检验检疫部门、质量监督管理部门和医院检验科会开展常见病原体检测，针对于食源性疾病进行检测，主要样本为食品、粪便等。本项目通过一次性检测多个食源性病原体和对肠道致病菌的快速分型，能满足疾控机构和基层医疗机构检验的早期快速诊断，增强疾病的防控能力和预警预测能力，减轻检验人员的工作压力。本项目解决了食源性病原体检测效率低，每次只能检测单种病原体及肠道病菌分型操作繁琐、检测时间长及检测价格高的问题：（1）病原体检测：项目团队开发了有多种引物及其组合的试剂盒，可同时进行多种病原体检测。集成了改良分子信标、荧光标记、熔点标签和熔解曲线技术的优势，发明了探针编码和探针熔解曲线技术，创建了具有我国自主知识产权的高通量检测技术，覆盖细菌、病毒和寄生虫等32种病原体。（2）肠道致病菌分子分型检测：改良了目前以血清凝集实验进行检测分型的方法，建立了沙门菌、副溶血弧菌、致泻性大肠杆菌等肠道致病菌血清型分子鉴定方法，可覆盖沙门菌200种血清型、副溶血弧菌13种O抗原和57种k抗原，5种致泻性大肠杆菌血清型。